㈠ 母種及原種 把分離提純后的銀耳菌絲和香灰菌絲單獨分開培養(yǎng)于試管中。生產母種時，先取出銀耳菌絲，并擴大到所需要的管數。然后放在25℃培養(yǎng)到銀耳菌落直徑約lcm左右。此時，再在每支長了銀耳菌絲的試管中，接種極少量香灰菌絲，待兩者長在一起時，就可以出售或用于原種生產了。
如先接香灰菌絲，因香灰菌絲生長快，很快覆蓋斜面，并很快消耗養(yǎng)料，其后接上的銀耳菌絲就不易生長。
若香灰菌絲和銀耳菌絲同時接種在一支試管中，同樣會出現銀耳菌絲少、香灰菌絲數量多的缺陷。
因此，生產銀耳母種(試管種)時一定要注意接種的先后，以及注意控制兩者的比例。
㈡ 銀耳及其“伴生菌” 在可以人工種植的食藥用中，屬于這種類型的菌目前僅有銀耳和金耳。它們子實體的形成，銀耳除了要有純銀耳菌絲外，還必須有“伴生菌”即香灰菌的幫助；金耳除了要有純金耳菌絲外，還必須有粗毛硬革菌的幫助，兩者缺一不可。在一般條件下，銀耳和金耳的純菌絲體生長相當緩慢，分解木質素、纖維素能力極弱，分別要依賴于香灰菌絲和粗毛硬革菌絲分解基質，提供它們生長發(fā)育所需的養(yǎng)分，否則便不可能形成子實體。所以在擴繁銀耳、金耳母種時，必須將兩種相應的菌絲體，移接在同一培養(yǎng)基上進行混合培養(yǎng)?，F以銀耳為實例介紹兩種菌絲混合制種技術:
1．斜面母種混接法（圖33-1） 取純銀耳菌絲試管母種和新配
制的PDA斜面試管各一支，連同接種器具一起放入接種室(箱)中，按無菌操作進行轉接，即挑取米粒大小、帶培養(yǎng)基菌種一塊，移接于空白試管斜面培養(yǎng)基上，加棉塞后置22-24℃下恒溫培養(yǎng)6-8天。當銀耳菌絲長至似繡球狀如黃豆大小時，再連同香灰母種一起移入接種室(箱)里，按無菌操作用接種鏟在距銀耳純菌絲團約2厘米處，接入一小塊香灰菌絲母種，培養(yǎng)2天在接種塊上便可見到白色菌絲，7天左右即形成白毛團而覆蓋銀耳純菌絲團，12-15天在白毛團的上方可見到有紅、黃色水珠即為成功。
需要指出，用銀耳與香灰菌的斜面混合母種擴接原種時，應切
去斜面的前后端，只取其繡球狀的銀耳純白菌絲及附近黑灰色的香灰菌絲用于轉接。因此1支斜面母種只能接1瓶原種。
圖33-1 斜面母種混接法
瓶裝木屑原種混接法（圖33-2） 如果沒有銀耳純菌絲，將
銀耳孢子培養(yǎng)出芽孢母種，再接入瓶裝木屑培養(yǎng)基制成的香灰菌母種，混合培養(yǎng)而成。
根據接種需要量，按1支香灰斜面母種擴接12-15瓶木屑培養(yǎng)基的比例，將香灰菌母種試管和經滅菌的瓶裝木屑培養(yǎng)基，以及接種用的器具，一起放入接種箱里，按無菌操作，用接種鏟挑取黃豆大小的香灰菌母種一塊，接入木屑培養(yǎng)基瓶中。接種完畢，移至24-26℃下培養(yǎng)，約經2天即可見到接種塊上萌發(fā)白色菌絲。此后要隔天檢查，發(fā)現雜菌及時檢出剔除。一般培養(yǎng)11天左右，香灰菌絲可向培養(yǎng)基內延伸約3厘米，此時可觀察到培養(yǎng)基表面有灰褐色或黑褐色的分泌物，這表明香灰菌絲生長旺盛，應及時接入銀耳芽孢母種。
按1：12-15的比例，取銀耳芽孢母種試管和培養(yǎng)好的木屑培養(yǎng)基香灰菌母種，一起放入接種室(箱)中，按無菌操作，用無菌接種刀劃破香灰菌絲表層，再用無菌接種鏟挑取少量銀耳芽孢，接入香灰菌絲體中(圖33-2)。混合后將瓶移至23-25℃下培養(yǎng)，經10天左右即可見到銀耳芽孢接種處生長濃白色菌絲。再培養(yǎng)18天左右即出現紅、黃色水珠，25天左右便可觀察到有扭結狀子實體原基，說明培養(yǎng)成功。1瓶這樣的木屑混合種可擴接30-40瓶原種(二級種)。
圖33-2 瓶裝木屑原種混接法
1．銀耳芽孢； 2.香灰菌； 3.劃破香灰菌種表層；
4.挑取銀耳芽孢；5.接入香灰菌種瓶中
?、?種植種的生產 根據原種生長的好壞，耳基大小，銀耳菌絲"吃料"的深度，來決定每瓶原種應擴接的瓶數。為了保證質量，盡量控制在40-60瓶之內。如果原種能攪拌得很均勻，使銀耳菌絲和香灰菌絲混合得很均勻，每瓶原種也可能接100-200瓶種植種。
㈣ 注意事項 要生產出優(yōu)良的銀耳菌種，除了注意上述的各項要求，如無菌操作之外，還必須注意如下幾個方面:
1．生物專一性 銀耳菌絲和香灰菌絲配合也有專一性。因此，為了生產有效的銀耳菌種，我們必須從同一塊耳木上分別獲得銀耳的純培養(yǎng)(包括酵母狀分生孢子或銀耳菌絲)和純的香灰菌絲。不同地區(qū)或同一地區(qū)不同耳木(樹種)上得來的銀耳菌絲和香灰菌絲不能隨便調換，隨意組合。否則，就有造成衰敗的可能性。經調換和組合的效果，必須根據銀耳菌絲在木屑培養(yǎng)基中定植的情況，以及耳基形成的大小，開片的情況來判所。凡是銀耳菌絲能繼續(xù)生長，形成耳基和順利開片的，便可以繼續(xù)擴大并用于生產，否則就不能使用。
接種比例:根據銀耳菌絲生長較慢，香灰菌絲生長很快
這一個特點，在純的混合培養(yǎng)時，必須注意銀耳菌絲和香灰菌絲的接種比例。為了達到控制兩者的接種比例，采用先培養(yǎng)銀耳菌絲，后配香灰菌絲的辦法，最為理想。如果說銀耳菌絲的接種比例應達到1000:1也不算過份的(銀耳菌絲發(fā)展到直徑約lcm，其內有成千上萬條菌絲，只要配上幾條香灰菌絲就可以了)。否則，銀耳菌絲很少，香灰菌絲占絕對優(yōu)勢，將來就不會出耳或出耳率很低。若采用在香灰菌絲中加入酵母狀分生孢子的方法來生產菌種的話，那么銀耳酵母狀分生孢子的數量是很大的，每毫升培養(yǎng)液中銀耳酵母狀分生孢子的個數可達10億-100億個。在香灰菌絲生長的木屑培養(yǎng)基中加入酵母狀分生孢子液，因酵母狀分生孢子分散在木屑顆粒中不集中，而且不是所有的酵母狀分生孢子都能萌發(fā)成菌絲。因此，用此法生產銀耳菌種，效果不很理想，若得不到銀耳菌絲，可以把銀耳酵母狀分生孢子集中地涂在長了香灰菌絲的木屑培養(yǎng)基表面，這樣銀耳酵母狀分生孢子比較容易萌發(fā)。
3．培養(yǎng)條件 銀耳純菌種(酵母狀分生孢子或銀耳菌絲)的
培養(yǎng)條件和銀耳原種、種植種(混合培養(yǎng))的培養(yǎng)條件是有一些不同的。因此，必須注意混合培養(yǎng)的條件，使銀耳菌絲和香灰菌絲都能適應同一培養(yǎng)基，同一培養(yǎng)條件。例如將溫度控制在20-28℃范圍之內(最好是23-25℃)。原種的含水量控制在65%，種植種的含水量控制在65%-70%之間。因為原種培養(yǎng)基稍干，有利于銀耳菌絲的生長，不易產生酵母狀分生孢子，有利于擴大為種植種;而種植種稍濕一些，有利于酵母狀分生孢子的產生和繁殖，此孢子液滲入木屑培養(yǎng)基深處，和香灰菌絲均勻混合，可以彌補銀耳菌絲"吃料"不深 只長在表層的缺陷，使出耳率更高，更穩(wěn)定。
還必須根據每一瓶原種耳基生育的狀況，來確定該原種是否可以擴大為種植種，以及每瓶應擴大幾瓶種植種。凡是混合培養(yǎng)后，能使銀耳酵母狀分生孢子萌發(fā)，銀耳菌絲能繼續(xù)生長，形成耳基，耳基能不斷長大的組合，都是有實際應用價值的菌種。原種經嚴格挑選，凡耳基大，銀耳菌絲生長多(吃料深的)，香灰菌絲粗壯有力，攪拌后擴接的瓶數就多。反之，就不應擴大為種植種。為了更加保險起見，每瓶以擴大40-60瓶為宜?？傊?，必須使每一瓶新接種的培養(yǎng)基都有銀耳菌絲和香灰菌絲，或酵母狀分生孢子和香灰菌絲?；蛘甙言N攪拌之后，塞上棉花塞再培養(yǎng)3-5天，使攪斷的銀耳菌絲再生新的菌絲，這樣才能保證種植種的質量。
4．提純復壯 防止菌種因長期使用，生活力降低，出現耳片發(fā)黃，不易開片，再生力差的毛病。根據生產的方式選用不同菌齡、不同生理成熟度的銀耳菌株。如段木種植時，應選菌齡小，成熟度低，銀耳氣生菌絲—白毛團旺盛，不易膠質化的菌株;瓶栽時，應選菌嶺大，成熟度高，白毛團小，容易膠質化并易開片的菌株。香灰菌絲應選爬壁力強，羽毛狀分枝長的，分解木材能力強的菌株作為段木種植的菌株，而代料種植時，香灰菌絲要稍"弱化"一些的菌株才好，否則滿瓶、滿袋都是香灰菌絲，有限的營養(yǎng)都被香灰菌絲消耗掉，銀耳反而長不大。
原種貯藏的時間太長，耳基很大，培養(yǎng)基的養(yǎng)料消耗過甚，菌種的生活力已衰退，應棄之不用。否則使用效果還不如適齡的種植種再擴大培養(yǎng)的菌種。
5．母種保存 母種應貯藏在4-15℃的冰箱中。每1-3個月移植一次。原種若不馬上使用，也應保存在低溫、干燥的場所。種植種滿瓶后至45天之內就應盡早地種下去。
銀耳純菌種(銀耳菌絲和酵母狀分生孢子 俗稱芽孢)長期單獨保藏，所長的子實體有變黃的趨勢；而和"香灰"菌絲混合培養(yǎng)，并經過長期保藏，子實體較不易變黃。為了得到雪白的銀耳，菌種應從色澤潔白的銀耳(野生的或家生的)中進行采種。保種3年以上就應注意色澤的問題。
